HEMATOLOGY(일반 혈액검사)
RBC(Red blood cell count)
1. 측정법의 종류와 원리
체내에 있는 적혈구 수 전체를 측정한다는 것은 불가능하므로 일정 용적의 혈액 속에 포함되어 있는 적혈구의 수를 산정하고 그 수를 적혈구 수로 표시하고 있다. 단위는 1㎕당(㎣) 또는 1ℓ당 몇 개로 나타낸다. 혈액을 희석액으로 일정 비율로 희석하여 그 희석액을 일정 용적 속에 넣고 그 속의 적혈구 수를 산정하는데, 산정법에는 현미경을 이용하여 계수하는 수기법과 기계에 의해 자동적으로 측정하는 자동혈구계산법(automatic method)이 있다. 수기법에 따른 혈액의 희석을 pipet의 일종인 전용 희석 pipet(Thoma diluting pipet)을 사용하는 방법과 메스 pipet으로 하는 방법이 있다. 수기법은 오래전부터 표준법으로 이용되어 온 방법으로 그 원리는 혈액을 일정 비율로 희석하고 그것을 일정 용적에 넣은 후 나타나는 수를 count 하고 희석배수와 체적으로 환산하는 방법이다. 조작에 어느 정도 숙련이 필요하고 시간이 걸린다. 수기법에서는 분석 오차가 10%까지 허용하고 있다.
2. 수기법(Manual method)
1) 기구 및 시약
(1) 채혈 도구, 탈지 또는 gauze
(2) 적혈 구용 희석 pipet(Thoma red cell diluting pipet)
- pipet에 101 mark까지 눈금이 있고 둥근 부분의 중앙에 붉은 유리구슬이 들어 있다.
(3) mouse piece가 붙어 있는 고무관(rubber sucking tube)
(4) pipet shaker
(5) binocular microscope
(6) Hemocytometer와 cover glass
(7) Handy tally counter
(8) 적혈구 희석액
2) 결과
계수된 수를 10,000배로 하는 이유는 계수된 구획의 면적은 1/400 × 80〓1/5㎜이고, 계산실의 깊이가 0.1㎜이므로 용적은 1/50㎕이다. 희석 pipet에 의한 희석이 200배이므로, 50 × 200〓10,000배 하면 1㎕당 적혈구 수가 된다.
3) 정상치
남성은 450-650만/㎕(평균 472만/㎕), 여성은 400-600만/㎕(평균 430만/㎕), 신생아는 500-725만/㎕
WBC(White blood cell count)
1. 측정법의 종류와 원리
원리는 적혈구 수 산정과 같다. 산정하기 전에 희석액이므로 모든 적혈구를 용혈 시킬 필요가 있다. 역시 수기법과 자동 백혈구 계산기에 의한 방법이 있다. 정상인의 백혈구수는 적혈구 수의 약 1/1000이므로 측정 시 혈액의 희석배수는 적혈구의 희석 배수보다 적게 된다.
2. 수기법
1) 기구 및 시약
(1) 채혈 기구는 적혈구 수 산정 수기법과 같다.
(2) 희석 pipet는 백혈구 용인 것
(3) 희석액
Turk용액, 0.1N HCl
(4) pipet shaker
(5) microscope
2) 정상치
백혈구수의 정상치는 연령, 채혈 법, 측정법, 보고자 등에 따라서 다르지만, 성별 차이는 없다. 정맥혈을 수기법에 의해서 측정한 성인의 정상치는 5,000-10,000/㎕(평균 7,000/㎕) 정도이다.
Hgb(Determination of hemoglobin concentration)
혈액의 단위 용적당 포함되는 혈색소 즉 헤모글로빈(Hb)의 농도를 측정한다. Hb량이라고 불리는 적도 있으나 단위는 g/㎗로 나타내기 때문에 실제로는 농도이다. 적혈 구용 적치 및 적혈구 수의 측정, Hb의 농도 측정 이 세 가지 종류의 검사는 절혈 구계의 병, 즉 빈혈과 적혈구 증가증의 진단에 가장 중요한 자료가 된다.
1. 측정법의 종류와 원리
혈색소는 불안정한 물질이기 때문에 표준액을 만들기 어렵다. 그래서 혈액에 약제를 넣어서 혈중의 혈색소를 안정된 유도체로 변화시켜 그 색조의 농도를 광전 비색계 또는 육안으로 읽어내고, 이미 알고 있는 표준액의 검량선을 이용하여 환산한다. 여러 가지 방법이 있고 먼저 변화시키는 혈색소 유도체의 종류에 따라서 Direct matching methods, Acid hematin 법, Alkali hematin 법, Oxy-Hb 법, 시안화 메트 헤모글로빈 법, 그 외에 가스 측정법이나 화학적 측정법이 있으나 시간이 많이 소모되며 기술적인 어려움도 있어 널리 사용되지 않고 있다. 색조의 강, 약을 읽는 데는 육안 법과 광전 비색계를 이용한 밥법 등이 있다.
2. Cyanmet-헤모글로빈 법
1) 측정원리
아래의 반응에 의하여 적혈구내 혈색소를 cyanmet-hemoglobin으로 바꾼다.
Hb + K3Fe3+(CN) 6 -----→ Met-Hb
Met-Hb + KCN -----→ Cyanmet-Hb
시약 가운데에 potassium ferricynide와 potssium cyanide가 함께 들어 있으므로 위의 반응이 동시에 일어난다. 시안화 메트 헤모글로빈은 안정된 색소로 540nm에서 최대 흡광도를 나타낸다. 광정 비색계를 사용한 파장 540nm 또는 녹색 필터로 흡광도 또는 투과율을 측정하고 표준액으로 작성한 표준 검량 곡선에서 혈색 소량을 산출한다.
2) 정상치
건강 성인 남자는 14-18g/㎗(평균 16g/㎗), 건강 성인 여자는 12-16g/㎗ (평균 14g/㎗)이다. 대개 Hb이 낮은 경우는 anemia 때이고 높아지는 경우는 적혈구 과다증 또는 탈수증인 때이다.
Hct(Hematocrit, 적혈구 용적 측정)
Hct는 혈액에 포함되어 있는 적혈구의 용적 비율(%)로서, 관에 들어있는 혈액을 원심 분리하여 측정하는 것에서 붙여진 이름이다. 측정법이 비교적 간단하기 때문에 빈혈이나 적혈구 증가증의 진단에 중요한 자료로서 이용되며, 육안으로 백혈구의 증가 여부와 황달 혹은 용혈의 여부를 관찰할 수 있는 장접이 있다.
1. 측정법의 원리와 종류
일정한 크기의 시험관에 혈액을 넣고 원심분리하면 혈액 내 각 구성성분의 비중 차이에 의해 분리된다. 내경이 균일한 관에 혈액을 넣고 원심 하여 직접 측정하는 원심 법, 전기전도 도법, 적혈구 수와 평균 적혈구 용적에서 계산하는 간접법이 있다. 원심 법에는 비교적 두꺼운 윈트로브 관을 이용하는 macro법과 모세관을 이용하는 micro 법이 역사적으로 가장 오래되었지만, micro 법이 혈액량을 적게 시용하는 장점 외에도 조작이 비교적 간단하고, 원심 시간이 짧다는 이유에서 현재는 거의 이 방법이 사용되고 있다.
2. 정상치
Hct치의 정상치는 Hb농도와 마찬가지로 성, 연령, 채혈 부위 등에 따라 차이가 나며, 측정법에 따라서도 차이가 있다. 정맥혈을 micro 헤마토크리트 법으로 측정한 경우, 성인의 정상치는 남성이 40-54%(평균 45%), 여성이 34-49%(평균 39%)로, 남성 쪽이 약 6% 높다. 신생아는 44-64% 정도 된다. Wintrobe 법에서는 약 3% 높은 수치를 나타낸다. 채혈 부위와 연령, 임신 등의 생리적인 조건에 따른 변동은 Hb 농도인 경우와 마찬가지이다.
MCV(Mean corpuscular volume, 평균 적혈구 용적)
적혈구 한 개의 평균 용적으로 단위인 fl(femtoliter)은 10-15ℓ에 상당한다. 자동혈구 계산기 중에는 MCV를 직접 전기적으로 측정하는 종류가 있다. 정상치는 89±11fl이다. (평균치 ±2SD) 정상 범위에 있으면 정구성 normocyte, 낮으면 소구성 microcytic, 높으면 대구 성 macrocytic이라고 부른다.
MCH(Mean corpuscular hemoglobin, 평균 적혈구 혈색 소양)
적혈구 한 개에 포함되는 혈색소로 단위는 pg(picogram) 또는 1 × 10-12g에 상당한다.
정상치는 30±4pg이다.
MCHC(Mean corpuscular hemoglobin concentration)
적혈구 한 개에 포함되어 있는 혈색소 농도를 W/V%로 표시한 것이다. 정상치는 33±4%이다. 정상범위에 있으면 정색(소) 성, 낮으면 저색(소) 성이라고 한다. 정상이라도 적혈구 내의 Hb 농도는 거의 포화상태에 있으므로 정상치보다 높아지는 경우는 드물다. 단, 생후 1개월 이내의 젖 유아의 정상치는 성인보다 약간 높은 수치를 나타낸다.
PLT(Platelet count)
1. 측정법의 원리와 종류
측정원리는 적혈구 수 산정 시 원리와 같다. 측정방법은 역시 수기법과 자동 기계 측정법으로 크게 구별되며 수기법은 다시 직접법과 간접법으로 나누어진다. 그 정상치는 방법의 차이 또는 보고자에 따라서 다르고, 적혈구 수나 백혈구 수에 비하여 그 폭이 크다. 그 이유로서는 혈소판이 이물질 단면에 점착, 응집하여 파괴되기 쉽기 때문에 유혈 중의 진짜 수치보다 적게 산정되고, 크기는 2-3㎛로 작기 때문에 먼지나 염색액의 잔류물로 보는 오류를 범하기 쉬워 측정오차가 큰 것을 들 수 있다. 따라서 혈소판 자체의 성질을 고려한 여러 가지 개량 법이 발표되고 있다.
직접법 : 계산판을 이용하여 다른 혈구와 마찬가지 요령으로 산정하는 방법이다.
간접법 : 도말 표본상에서 일정 수의 적혈구를 헤아리는 동안에 나타나는 혈소판 수에서 적혈구에 대한 비율을 찾아내고 달리 산정한 적혈구 수에서 계산하여 구하는 방법이다.
과거에는 간접 법인 Fonio 법이 많이 사용되어 왔으나 약 10년 전부터 직접적인 Brecher-Cronkite 법이나 Rees-Ecker 법 등이 주로 이용되고 있다.
ESR(Erythocyte Sedimentation Rate)
1. 측정법의 종류와 원리
적침은 혈액 침강속도(혈침)라고도 말한다. 전혈을 유리관에 넣어서 수직으로 방치하여 적혈구의 침강상태를 관찰하는 것으로 오래전부터 임상검사에 넓게 이용되고 있다. 즉 적침 수치는 적혈구 또는 연전 형식에 의한 RBC 덩어리의 반지름의 2승에 비례하고 혈정 점도에 반비례한다. 따라서 적혈구 덩어리가 보이는 myeloma 등에서 적침이 현저하게 촉진되는 것은 이해가 된다. 그러나 그때 혈장 점도도 상승한다. 적침의 측정방법은 일정 시간 내에 침강하는 거리를 측정하는 Westergran 법 혹은 Wintrobe법과 Cutler 법, Landan micro 법 이외에도 침강 거리에 도달하기까지의 시간을 측정하는 linzenmeiner 법이 있다.
2. Wintrobe-Landsberg 법
이 법은 윈트로브의 nematocrit 관을 사용하는 것과 항응고제로 EDTA나 이중수 산염을 사용하는 점이 Westergren법과 다르다. 과거에는 macro 법으로 RBC용적을 별 조작 없이 검사할 수 있어 많이 사용해 왔으나 현재는 많이 사용하지 않는다. 정상치는 Westergren 법과 마찬가지이다.
* Normal reference
男 : 10mm ↓
女 : 15mm ↓
Wintrobe 법에서는 빈혈이 침강속도에 영향을 미친다고 하여 이를 보정해 주기 위해 적혈구 용 적치(Hct)를 산출한 후 교정 ESR chart를 이용하여 교정해 준다. 따라서 결과 보고도 ESR값과 corrected ESR 값을 모도 보고한다.
3. 임상학적 의의
적침의 이상으로서 촉진과 지연이 있으며 촉진 쪽이 임상적 의의가 크다. 조직 파괴나 염증성 질환 등에서는 현저히 증가하는 경향이 있다. 적침을 촉진시키는 경우는 혈장단백에 이상이 생기는 질환, 염증성 질환, 생체내 조직의 붕괴를 가져오는 질환, 빈혈을 불러일으키는 질환 등 4가지의 경우가 있다. 병적인 촉진요인은 혈장단백 성분의 변화와 빈혈이다.
Macrocytosis
정상보다 큰 적혈구가 눈에 띄는 경우로 특히 크고(12㎛이상) 약간 타원형으로 색도 짙은 것을 거적 혈구(megalocyte)라고 한다. 악성빈혈 등의 거적 아구성 빈혈증에서 많이 발견된다.
Microcytosis
정상보다 작은 적혈구가 눈에 띄는 경우로 철 결핍성 빈혈 등의 소구성 빈혈이나 구상 적혈구증이나 분열적 혈구를 생기게 하는 질환에서 볼 수 있다.
Anisocytosis
적혈구 크기가 다양하게 출현하는 경우로 여러 가지의 빈혈에서 볼 수 있다.
Hyphocromia
혈색소 합성이 저하되어 있기 때문에 얇게 염색하는 경우로 철 결핍성 빈혈이나 thalassemia 등의 저색 성빈혈에서 보인다.
Polychromatophilia
호염기성 색소와 혈색소 색조가 섞여서 청회색을 띠는 적혈구를 말한다. 염기성 적혈구는 RAN를 포함하는 어린 적혈구, 즉 망상적혈구에 해당한다. 용혈성 빈혈 등에서 볼 수 있다.
Poikiloytosis
동일 혈액 도말에서 다양한 형태를 한 적혈구가 눈에 띄는 경우의 총칭으로 이상 형태의 종류가 후술 하는 특유한 것인 경우에는 그 이름을 부른다. 전술한 분열적 혈구도 여기에 속한다.
Spherocytosis
구상적 혈구란 정상적 혈구에 비해서 직경이 작고 두께가 두꺼운 적혈구로 반드시 구형인 것은 아니다. 전체적으로 짙고 중앙부는 약간 얇은 것이 많지만, 전형적인 구형인 경우에는 중앙부 쪽이 오히려 더 짙게 보인다 유전성 구상 적혈구증, 자기 면역성 용혈성 빈혈 등에서 나타나며 진단에 중요한 영향을 미친다.
Sickle Cell
양끝이 날카로운 낫 같은 모양을 하고 있는 적혈구로 흑인에게 많은 겸상 적혈구증 즉, Hb-S증에서 볼 수 있다. homo 형에서는 보통 도말 표본에서도 볼 수 있지만, hetero형에서는 적혈구를 산소분압이 낮은 곳에서 방치하면 만들어진다.
Target Cell
표적과 같이 중심부와 주변부가 짙게 염색되고, 그 중간부가 엷게 염색되는 적혈구로 용적에 비해 막의 면적이 큰 경우에 생긴다. thalasemia나 각종 이상 혈색소 혈증 외에 철 결핍성 빈혈, 비장 적출 후, 중증의 폐쇄성 황달 등에서 볼 수 있다.
Toxic granules
호중구에서 호중성 과립이 크고, 진한 염색성을 나타내는 것으로 세균감염증 등에서 볼 수 있다.
Vaculoe
무색으로 구멍 뚫린 듯한 모양을 보인다. 단구는 정상적으로 보이는 것도 있지만 호중구나 림프구에서 볼 수 있는 것은 대부분 이상으로 감염증 등에서 볼 수 있는 일종을 변성이다. 인공적으로도 채혈 후 도말까지의 시간이 너무 길면 공포가 생긴다.
Differential Count
정상적으로 볼 수 있는 각 혈구의 형태상의 특징은 이론으로 공부하였을 것이나 분류가 쉽지 않다. 그러나 판정에 익숙해지면 그렇게 어렵지 않을 것이다. 가끔 호중구의 간 상핵 구와 분절 핵 구, 단구와 림프구의 감별이 문제가 되는 경우가 있다. 분절 핵은 필라멘트로 연결되어 있는 것으로 하지만, 입체적으로 접어서 중복된 것으로는 간상 핵과의 구별이 어려워진다.
이상 세포를 포함하여 일반적으로 백혈구의 종류 판정에는 아래의 여러 가지 점을 유의하여 관찰하고, 그러한 특징을 종합하여 기존의 어느 혈구에 가장 가까운가를 판단한다. 혈구 양상에 대한 인식을 각자의 뇌세포가 행하기 때문이다. 그러나 기존의 혈구에 적용시키는 것이 곤란한 세포가 발견된 경우에는 그 특징을 파악하여 다른 항목으로 분류해 두던가 숙련된 전문가의 자문을 받도록 한다. 그 세포를 나중에 관찰하기 위해서 현미경의 표본 이동장치의 스켈을 기록해 둔다.
백혈구의 분류는 다음과 같은 특성의 차이에 의해서 분류된다.
① 세포 전체의 크기와 형태
② 핵 : (a) 형태, (b) 위치, (c) 크로마틴 망의 양상(緉上),
(d) 핵소체(수, 크기 등), (e) 봉입체 등.
③ 세포질 : (a) 넓이(세포질/핵의 비율), (b) 색조, (c) 핵 주명 정(核周明庭),
(d) 과립의 유무(색조, 크기, 형태, 분포), (e) 봉입체의 유무,
(f) 공포의 유무 Rubriblast
1. 크기
대략 직경은 20㎛ (12~20㎛)로 적혈 구계 전구물질 중 가장 크다.
2. 핵
핵은 상대적으로 크며, 원형 또는 난원형으로 직경 0.2㎛되는 암청색의 명료한 핵소체가 1~2개 발견된다. 염색질(chromatin)은 섬세한 망상 구조물로 적자색(reddish-purple)으로 염색되어 균일하게 분포되어 있고, 사이에는 분홍색으로 염색되는 부 염색질(parachromatin)이 극히 작은 점상으로 관찰된다.
3. 세포질
암청색의 좁은(약 2㎛) 세포질이 핵 주위를 띠(band)처럼 둘러싸여 양은 상대적으로 적다(세포의 10~15%). 간혹 핵 주명 정(perinuclear halo)이 확인되기도 한다. 핵과 세포질의 비(N/C ratio)는 8 : 1 정도이다. 정상 골수에서 약 1%가량 발견된다.
Prorubricyte
1. 크기
직경 10~18㎛로 전정 적아 구보다 약간 작다.
2. 핵
원형 또는 난원형이며, 약간 굵은 염색질이 대개 덩어리 져 있거나 바퀴 모양을 하고 있다. Parachromatin은 분홍색으로 더욱 명료하게 나타난다. 해인은 흔적으로 있거나 없다.
3. 세포질
전정 적아 구보다 약간 더 진한 암청색인 세포질의 폭은 더 넓게 나타나고, 핵 주명 정도 확인된다. 핵과 세포질의 비는 약 4~6 : 1이다. 정상 골수에서는 약 4%가량 발견된다.
Rubricyte
1. 크기
직경 8~14㎛로 호염성 정적 아구보다 약간 작다.
2. 핵
세포의 약 1/2 정도 차지하며, 염색질은 호염성 정적 아구보다 더 크게 덩어리 져 있으며, parachromatin은 분홍색의 소형 또는 무정형으로 되어 있다. 해인은 없다.
3. 세포질
핵이 위축됨에 따라 세포질의 폭은 상대적으로 넓어지고, 혈색소가 합성되면서 리보좀(RNA)은 점차 적어져 세포질의 색상은 다염성(blue-gray or pink-gray)으로 나타난다. 이 시기에 합성되는 혈색소의 양은 약 50~80%이다. 정상 골수에서 10~20%가량 존재하고 성인의 순환 혈액에서는 존재하지 않지만 신생아에서는 가끔 볼 수 있다.
Metarubricyte
1. 크기
직경 7~10㎛로 규정형(regular)이다.
2. 핵
완전히 위축(pyknotic)되어 아주 작아지며, 더 이상의 유사분열은 없다. 대개 한쪽으로 편재되어 있고, 염색질은 농축되어 균질화되므로 구조상을 볼 수 없다. 색상은 암적색 또는 청흑 색으로 나타난다. 핵은 간혹 분엽되어 있기도 한데 이것은 돌출, 무사 분열, 용해에 의하여 소실된다.
3. 세포질
더 많은 혈색소가 합성되어 있어(80~90%) 거의 분홍색을 나타낸다. 그러나 polyribosome이 점점 적어지기는 하나 아직은 약간 남
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