200% 중요! 그람 음성 막대균(Gram negative bacilli) / 장세균(Entrobacteriaceae)의 KIA 와 IMViC 추가 정리

세균학의 기초 검사인 gram stain에 의해서 gram positive와 gram negative균으로 나뉜다는 것을 알고 계실 것입니다. 그람 양성 알균/막대 균에 이어서 그람 음성인 알균/막대 균을 보도록 하겠습니다. 그람 음성은 gram stian을 했을 때 에탄올에 의해서 염색 시약인 크리스털 바이올렛 시약과 매염제가 결합된 염색제를 탈색시킵니다. 그래서 Safrainin o 염색제를 통해서 결과색이 빨갛게 나오는 것을 볼 수 있습니다.

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그람 음성 막대 균(Gram negative bacilli) : 장세균(Entrobacteriaceae)

그람 음성 막대 균이자 옛 용어인 간균에서 세균들은 다양합니다. 그중에서 가장 중요하고 외울 양도 많은 장세균(Entrobacteriaceae)과 입니다. 이 과에는 다양한 세균이 많은 것을 알 것입니다. 병원성인 균과 비 병원성인 균, 언제든지 병원성으로 바뀔 수 있는 상재균 까지 정말 다양합니다. 그만큼 검사 방법 또한 다양합니다. 오늘은 장세균을 위주로 설명을 할 것이니 천천히 따라오시길 바랍니다.

장세균(Entrobacteriaceae)의 특징으로는 일단 포도당을 발효(FERMENTATION)하는 균종입니다. 쉽게 말하자면 산소가 통하지 않는 공간에서도 당을 분해하는 능력이 있다는 말입니다. 그리고 Oxidase가 음성(negative)입니다! 예외적인 균도 있다는 점도 말씀드립니다. 그리고 장세균은 특징적으로 질산을 환원하는 능력이 있습니다. 또한 배지에 있어서는 MacConkey agar에서 잘 자라고 몇 종류의 세균외에 37도에서 운동성을 보입니다.

세균의 운동성

운동성에 있어서는 편모(flagella)의 유무입니다. 어떻게 편모가 배치가 되어있느냐에 따라 장세균의 종류가 달라지게 됩니다. 편모가 많기도 하고 없는 균들도 있습니다. 편모의 위치에 따라서 주모 성, 단모 성, 쌍 모성 , 총 모성, 축사로 나뉘게 됩니다. 주모 성(peritrichous) 은 균 주변으로 편모가 굉장히 많이 분포되어 있으며 장세균이 여기에 속하게 됩니다. 하지만 장세균에 속하지만 운동성이 없는 4가지만 기억해주시면 좋을 듯합니다. Klebsiella , shigella , salmonella, Yersinia입니다. 문제 내기 참 좋은 것 같네요.


그림과 같이 방금 말한 주모 성은 장세균, 편모가 하나 있는 단모 성에 Pseudomonas가 있습니다. 이 균은 GNFB 중 유일하게 단모 성인 세균입니다. 그 외에 VIbrio, Aeromonas , Camphylobacter 등이 있고 축사를 가진 나선균이 있습니다.

장세균(Entrobacteriaceae)의 정리

호기성 그람 음성 막대 균은 O-F test인 산화-발효 시험을 통해서 나뉘게 됩니다. 그런데 산화도 발효도 되지 않는 균이 있는데 compylobacter와 위에서 중요하지요 Helocobacer균입니다. 산화를 하는 균에는 이빨 모양 Acinetobacter와 Pseudomonas 균이 있습니다. 발효를 하는 균은 장세균과(Entrobacteriaceae)와 비브리오(vibrio 속)입니다.

발효를 하는 이 두 균을 분리하기 위해서는 oxidase test입니다. 앞서 본 듯이 장내 세균과는 oxidase가 음성입니다. (반응이 없습니다). 하지만 양성균은 비브리오 속입니다. 종류로는 비브리오, Aeromonase , Plesiomonas가 있습니다. 이렇게 나누어지고 또한 장세균과 안의 균들을 나누기 위해서는 감별 배지인 배지에 접종을 해서 lacose의 분해와 지시약인 neutral red를 통한 균의 색으로 균을 나누게 되는데 그 배지는 바로 MacConkey agar입니다. 배지에 대해 자세한 설명은 밑을 참고해주시기를 바랍니다.

이 배지에 의해서 negative(무색)으로 나오는 균은 shigella, salmonella, proteus, Serratia, Yersinea가 있으며 positive(red, pink) 균으로는 E.Coli, klebsiella, Enterobacter, Citrobacter 등이 있습니다.

장세균과(Entrobacteriaceae)를 분별하는 데 있어서 다양한 검사를 하게 됩니다. 그래서 각 균들의 성상들이 각각 다르기 때문에 모두 암기하셔야 됩니다. 이 부분이 미생물학을 다 차지한다고 할 만큼 외울 양이 엄청 많습니다.

까만 콩 강 선생 혼자 아쉬운 마음으로 : KIA와 IMVic 시험

배지에 대해 추가적으로 KIA 와 IMVic 시험에 대해서 알기를 원합니다. 평판 배지와 다르게 KIA 배지는 길쭉한 시험관에 사면으로 배지가 굳어있는 것을 볼 수 있습니다. 균을 접종했을 때 색의 당의 발효와 GAS의 유무과 H2S인 황화수소의 생산을 기반으로 하는 검사로써 Kligler's Iron Agar입니다. 예를 들어서
살모넬라 균을 접종을 했는데 KIAgar의 성상이 바로 K/AG H2S입니다. 그림과 같이 사면 부분은 빨강이며 아래 부분은 노랑과 흑색의 황화수소를 분해하는 것을 볼 수 있습니다.

KIA는 Dextrose와 Lactose 같은 당 종류가 있으며 황화수소를 분해할 때 반응이 나오는 검사로써 그람 음성 막대 균을 구별할 때 좋으며 특히 shigella, salmonella를 분별할 때 유용합니다. shigella는 K/A입니다.
빨강경사/노란색아래 일 때 포도당은 분해하되 유당은 분해하지 못하고 노랑색 경사/노랑색 아래 일 때는 둘 다 분해를 하는 균입니다. 그리고 빨강 경사/빨강 아래 일 경우에는 유당만 분해하는 균입니다.

A/AG = E.coli , Klebsiella , Entrobacter, citrobacter
K/A = Shigella, Yersinia
K/AG = S.paratyphi, Serratia, Hafnia
K/AG H2S = Salmonella, Proteus
K/A H2S = S.typhi

IMVic test에 대해서도 보도록 하겠습니다. 이름만 봤을 때는 한 가지 검사로 보이게 됩니다. 하지만 이 검사는 4개의 검사를 통해 균의 성상을 알 수 있는 검사입니다. 이 검사는 바로 어떤 검사를 하는 가면

Indole test / Methyl red test / VP test / Citrat test입니다.

+ + - - 쁠쁠마마 / - - + + 마마쁠쁠 / - + - + 마쁠마쁠 / - + - - 마쁠마마 이런 식으로 외웠던 기억이 나네요 이 성상의 균들 또한 여러분은 외우셔야 합니다. 이 외에도 다양한 검사가 있고 그 검사에 따라서 균이 나뉘게 되니 정리를 잘해두시면 좋습니다. 모든 부분에는 나중에 한번 정리해서 올리도록 하겠습니다.

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